Table 1. Composition of reaction mixture with laccase in (+)-catechin aqueous solution (A), and analytical condition for catechin polymers (B)

A) Reaction mixture
Substrate

반응액 대비 0.5%(w/v of aqueous solution, DIW : MeOH = 95 : 5) → catechin은 물에 용해되지 않아 유기용매 수용액으로 조제하여 첨가
Enzyme

Novo DeniLite IIS : 120 LAMU/g from Aspergillus oryzae)

조제법 : 3 g/15 mL 0.1 M acetate buffer(pH 5.0) → buffer에 용해되지 않아 sonication 후 원심분리하여 상등액을 회수
Mixture

반응액 : 30 mL(반응액 대비 기질 양 0.5%)

효소 : 반응액 대비 단백질 기준(1.5%)
Reaction

반응 시 공기 중 O2는 자유롭게 유입

반응온도 : 30°C
B) Analytical condition
HPLC YL 9100, Young Lin Co., Ltd.
Column Phenomenex C18(250 × 4.6 mm, 5 μm)
Eluent A; 1% acetic acid in DIWB; acetonitrile
Gradient 0 → 40 min; A : B = 92 : 8 → 73 : 27% (v/v), 40 → 50 min; A : B = 72 : 27 → 20 : 8%, 50 → 80 min; A : B = 20 : 80%, 80 → 90 min; A : B = 20 : 80 → 92 : 8%, 90 → 95 min; A : B = 92 : 8
Flow rate 0.8 mL/min (injection volume; 20 μL)
Detection UV at 280 nm